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在法醫鑑識領域的應用中,常利用刑案現場採樣萃取之體染色體及粒線體進行DNA定序分析。然而因樣本內核酸含量通常極少,且體染色體DNA呈現高度降解狀態,故不利於定序樣品製備。相較之下,粒線體DNA (mitochondria DNA, mtDNA) 因為是環型結構較不容易降解,在細胞內也有較多拷貝數,因此在法醫鑑定領域被視為重要的遺傳標記。除此之外,因為粒線體主要遺傳自母親,所以mtDNA也經常被使用在母系親緣關係鑑定。
ForenSeq™ mtDNA Control Region Kit試劑組以D-loop上高特異性的HV-1及HV-2區域為目標,精心設計122 個引子對,經過PCR反應產生的擴增子皆具有≧3 bp重疊區域,以確保完整覆蓋HV-1和HV-2區域。且每個擴增子平均長度不超過150 bp,即使面對高度降解的DNA樣品仍保持絕佳效能;此外,經過優化的緩衝溶液也可以緩解法醫樣品製備過程中常見的抑制劑之影響,大幅提升PCR擴增效率。本試劑組可搭配MiSeq FGx定序儀進行分析,後續利用ForenSeq™ Universal Analysis Software v2 軟體與參考基因進行比對,以獲得變異位點資訊。
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